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產(chǎn)品介紹：             

產(chǎn)品說明

本產(chǎn)品可用于全血樣本的基因組DNA的純化。純化原理是首先利用紅細(xì)胞裂解液先去除血液中的紅細(xì)胞*，細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞核釋放基因組DNA，由硅膠膜柱可逆吸附體系內(nèi)的基因組DNA，經(jīng)蛋白酶消化、漂洗液清洗除去蛋白質(zhì)、脂質(zhì)等雜質(zhì)后，用純化液洗脫獲得基因組DNA。本產(chǎn)品適用于未凝固全血，以及經(jīng)各種抗凝劑（EDTA、肝素、檸檬酸）處理過的全血樣本。一次可從5-10 ml全血中提取到30-200 μg高純度基因組DNA（OD260/OD280 =1.7-1.9），此基因組DNA可直接用于PCR、酶切等后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

*本產(chǎn)品不能從全血中直接提取DNA，要去除血液中紅細(xì)胞后才能得到高濃度的基因組DNA。如要直接從全血迅速提取高純度基因組DNA，建議選擇Quick血液基因組DNA提取試劑盒（貨號(hào)：N1131、N1132）。

質(zhì)量控制

純化的基因組DNA質(zhì)量通過限制性酶切和單拷基因的PCR擴(kuò)增鑒定。

保存條件

蛋白酶K于-20℃保存。

其余試劑置于室溫（15-25℃）干燥條件下保存1年。

如果消化緩沖液DS和MS中沉淀，可在55℃加熱溶解，待恢復(fù)室溫后混勻即可使用。不會(huì)影響基因組DNA的純化效率。

操作步驟

1   取血液樣本，每5-10 ml血液加入到一只50 ml離心管中。加入2倍體積的紅細(xì)胞裂解液RS。漩渦振蕩或上下來(lái)回顛倒混勻。5,000 rpm離心3min，棄上清，收集白色或淡紅色沉淀，重復(fù)上訴步驟。

● 如沉淀仍然呈深紅色，表明紅細(xì)胞裂解不充分，可再加等體積紅細(xì)胞裂解液RS處理一次。

● 對(duì)于哺乳動(dòng)物全血，每5-10 ml全血中可提取30-200 μg的基因組DNA。如從鳥類、兩棲類或更低級(jí)的動(dòng)物血液中提取基因組DNA，因其血液中紅細(xì)胞有細(xì)胞核，血液用量勿超過500 μl/離心管。每500 μl全血中可提取200 μg的基因組DNA。

2   加入5 ml消化緩沖液DS，漩渦振蕩至形成完全均一的懸浮液。

● 如需去除RNA，可加入100 μl RNase A（100 mg/ml），振蕩15秒，室溫放置5min。

3   加入500 μl蛋白酶K和5.5 ml裂解液MS，漩渦振蕩混勻。65℃溫浴15 min。溶液應(yīng)變清亮，簡(jiǎn)短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。

● 加入裂解液MS時(shí)可能會(huì)產(chǎn)生白色沉淀，一般65℃放置時(shí)會(huì)消失，不會(huì)影響后續(xù)實(shí)驗(yàn)。如溶液未變清亮，說明細(xì)胞裂解不徹底，可能導(dǎo)致提取DNA量少和提取出的DNA 不純。

4   加入5.5 ml無(wú)水乙醇，上下顛倒混勻。此時(shí)可能出現(xiàn)絮狀沉淀。簡(jiǎn)短離心以去除管蓋內(nèi)壁的水珠。將溶液及絮狀沉淀轉(zhuǎn)移到純化柱中。12,000rpm離心1min，棄濾液。

● 此時(shí)基因組DNA被吸附于DNA純化柱中的硅膠膜上。

5   加入10 ml去蛋白液PS。12,000 rpm離心1min，棄濾液。

● 此步驟的作用是去除硅膠膜上吸附的蛋白、脂質(zhì)等雜質(zhì)，以獲得高質(zhì)量基因組DNA。

6   加入10 ml漂洗液PE。12,000 rpm離心1min，棄濾液。

● 漂洗液PE初次使用前用無(wú)水乙醇按1: 3稀釋，即含75%乙醇。

7   加入10 ml漂洗液PE。12,000 rpm離心1min，棄濾液。

8   12,000 rpm離心3min，以徹底去除純化柱中殘留的液體。

● 此步驟的作用是去除殘留乙醇，避免影響后續(xù)的酶促反應(yīng)（PCR或酶切）。同時(shí)利于基因組DNA充分溶解。

9   將純化柱置于新的1.5 ml離心管中。向純化柱中央處，懸空滴加30-100μl洗脫液TE。室溫放置2min。

10   12,000 rpm離心2min，管底即為高純度基因組DNA。-20℃保存。

● 洗脫液TE可用去離子水代替，但其pH需為8.0-8.5。

● 對(duì)洗脫液TE 60℃預(yù)熱，會(huì)提高基因組DNA的產(chǎn)量。

注意事項(xiàng)：

  ● RNA樣本保存液如出現(xiàn)沉淀，37℃加熱振蕩混勻。

  ● 加入RNA樣本保存液后，樣本不能立即置于-20℃或-80℃，要先4℃置放過夜，待組織充分浸潤(rùn)后再置于低溫保存。

  ● 樣品浸沒在RNA樣本保存液中，可在37℃保存1天，25℃保存1周，4℃保存1個(gè)月，-20℃長(zhǎng)期保存；使用時(shí)請(qǐng)注意保存時(shí)限。

  ● 保存在RNA樣本保存液中的樣本可不經(jīng)特殊處理，離心或直接使用和新鮮組織一樣的RNA提取方法提取RNA。

  ● RNA樣本保存液可以配合各種常見的RNA提取試劑盒使用，如東盛、invitrogen、omega等公司出品的RNA提取試劑盒，不影響試劑盒操作，不影響提取所得RNA質(zhì)量及其后續(xù)實(shí)驗(yàn)。