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細胞消化同樣的時間對細胞是公平的發(fā)表時間:2019-04-11 11:52 對于需要消化傳代的細胞,每一次的消化都是對這個細胞存活與否,狀態(tài)好與不好至關重要的考驗。 在消化的過程中,加入胰酶后,所有細胞都在被胰酶消化著,但是我們忽視了一個問題就是,細胞的生長狀態(tài)是不一樣的,每一個細胞的貼壁情況也是不一樣的,有的貼壁牢固,有的貼壁沒有那么牢固的,所以,讓所有的細胞消化同樣的時間對細胞是公平的。 具體操作: 1) 首先不加胰酶,倒掉舊培養(yǎng)基加入少量新培養(yǎng)基洗 1-2 遍,目的是將漂浮著的死細胞之類盡量洗掉。 2) 然后再加入少量新培養(yǎng)基直接吹打一遍,這一遍是把貼壁不牢固的細胞吹打下來。再用培養(yǎng)基洗一遍,兩次所得懸液混合傳入新瓶。 3)吸干凈瓶內剩余液體,加入 0.3 ml 左右的胰酶潤洗一遍,吸掉棄之,再加入 1 ml 左右的胰酶消化。消化的同時置于顯微鏡下觀察,待細胞與細胞之間間隙明顯的時候立即吸掉胰酶與干凈子頭里備用,加入新培養(yǎng)基開始吹打,吹打 2-3 遍后吸取懸液于試管或新瓶暫存。用 2 ml 左右新培養(yǎng)基洗一遍與前面的混合。也可以傳入新瓶培養(yǎng),以與后面及前面的做對比。 4)把前面剛吸出來的胰酶重新加進去瓶里繼續(xù)消化剩余的貼壁牢固的細胞。也可以用新的胰酶。繼續(xù)鏡下觀察,待剩余細胞間隙明顯,細胞獨立開來的時候,吸掉胰酶,加入新培養(yǎng)基吹打。懸液傳入新瓶培養(yǎng)。 5)對于特別難消化的細胞和對胰酶特別敏感的細胞的話,為了細胞更好的狀態(tài),更漂亮的樣子,必須分多批多次消化,這樣才能大限度地將胰酶對細胞的損傷降到低,保證細胞的狀態(tài)能夠優(yōu)。 |
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