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人膀胱癌順鉑耐藥株BIU-87/DDP操作流程發(fā)表時間:2020-06-28 15:59 人膀胱癌順鉑耐藥株BIU-87/DDP操作流程: 1、取出25cm2培養(yǎng)瓶,75%酒精擦拭培養(yǎng)瓶,拆下封口膜,放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中靜置3-4小時以穩(wěn)定細胞狀態(tài),然后換用新鮮完全培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)或進行傳代。 2、細胞傳代: 1)細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞一次; 2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化,再輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min; 3)棄上清,沉淀細胞用12ml完全培養(yǎng)基重懸,然后按1:2比例進行分瓶傳代,*后放入37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 4)待細胞完全貼壁后,觀察培養(yǎng)結(jié)果,之后進行換液培養(yǎng)或傳代。 3、細胞凍存: 1)細胞生長至覆蓋培養(yǎng)瓶的80%面積時,棄25cm2培養(yǎng)瓶中的培養(yǎng)液,用PBS清洗細胞一次; 2)添加0.25%胰蛋白酶消化液約1ml至培養(yǎng)瓶中,倒置顯微鏡下觀察,待細胞回縮變圓后加入完全培養(yǎng)液終止消化,輕輕吹打細胞使之脫落,然后將懸液轉(zhuǎn)移至15ml離心管中,1000rpm離心5min; 3)用適量的凍存液(FBS:DMSO=9 :1)重懸細胞,并放置于凍存管中; 4)先將細胞凍存管放置于-20℃ 1.5h,然后將其移入-80℃過夜,24h后轉(zhuǎn)入液氮中進行長期保存。使用程序降溫盒可直接放入-80℃。 4、細胞復蘇: 1)從液氮中取出細胞凍存管(注意:佩戴防爆管面具),快速將其置入37℃水浴中解凍,直至凍存管中無結(jié)晶,然后用75%的酒精擦拭凍存管外壁; 2)將凍存管中的細胞移至含5ml完全培養(yǎng)基的15ml離心管中, 1000rpm離心5min; 3)棄上清,沉淀用5ml完全培養(yǎng)基重懸,接種25cm2培養(yǎng)瓶,于37℃,5%CO2細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng); 4)第二天,換用新鮮完全培養(yǎng)基繼續(xù)培養(yǎng)。 |
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