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急性肝胰腺壞死病病原核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)操作方法發(fā)表時間:2020-04-03 16:08 急性肝胰腺壞死?。ˋHPND/EMS)病原核酸檢測試劑盒(PCR-熒光探針法)操作方法 1樣本的處理(在樣本制備區(qū)進行): 1.1、取 n 個滅菌的 1.5 mL Eppendorf 管,其中 n 為被檢樣品與陰性對照的和(陽性對照、陰性對照在試劑盒中已標(biāo)出),做標(biāo)記。(注:試劑盒中的陽性對照直接作為 PCR 檢測的模板,無需提取核酸) 1.2、每管加入 600 ?L 裂解液,分別加入被檢樣本和陰性對照各 200 ?L,一份樣本換用一個吸頭,再加入 200 ?L 氯仿,混勻器上振蕩混勻 5 s(不能過于強烈,以免產(chǎn)生乳化層,也可以用手顛倒混勻),于 4℃ 12 000 r/min 離心 15 min。 1.3、取與1.1 相同數(shù)量滅菌的 1.5 mL Eppendorf 管,加入 500 ?L 異丙醇(-20℃預(yù)冷), 做標(biāo)記。吸取1.2 各管中的上清液轉(zhuǎn)移至相應(yīng)的管中,上清液應(yīng)至少吸取 500?L,不能吸出中間層,顛倒混勻。 1.4、于 4 ℃、12 000 r/min 離心 15 min(Eppendorf 管開口保持朝離心機轉(zhuǎn)軸方向放置),小心倒去上清,倒置于吸水紙上,沾干液體(不同樣品須在吸水紙不同地方沾干);加入 600 ?L 75% 乙醇,顛倒洗滌。1.5、于 4 ℃、12 000 r/min 離心 10 min(Eppendorf 管開口保持朝離心機轉(zhuǎn)軸方向放置),小心倒去上清,倒置于吸水紙上,盡量沾干液體(不同樣品須在吸水紙不同地方沾干)。 1.6、4 000 r/min 離心 10s(Eppendorf 管開口保持朝離心機轉(zhuǎn)軸方向放置),將管壁上的殘余液體甩到管底部,小心倒去上清,用微量加樣器將其吸干,一份樣本換用一個吸頭,吸頭不要碰到有沉淀一面,室溫干燥 3 min,不能過于干燥,以免 RNA 不溶。 1.7、加入 11 ?L DEPC 水,輕輕混勻,溶解管壁上的 RNA,2 000 r/min 離心 5 s,冰上保存?zhèn)溆?。提取?RNA 須在 2 h 內(nèi)進行 PCR 擴增;若需長期保存須放置-70 ℃冰箱內(nèi)。 【也可參照《病毒 RNA 柱式提取試劑盒說明書》(貨號:HB-QPCR-01)使用,更方便快捷提取核酸】。 注:提取的 RNA 須在 2 h 內(nèi)進行 PCR 擴增;若需長期保存須放置-70 ℃冰箱內(nèi) |
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