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怎么做可以降低ELISA試劑盒操作的布景噪音發(fā)表時間:2020-03-19 09:45 在ELISA試劑盒的操作中,我們都認(rèn)為ELISA檢測的原理似乎很簡單,但要固定抗原,添加di一抗體、第二抗體和底物,并混合洗滌和關(guān)閉。然而,即使是普通的刷牙和關(guān)閉,如果做不好,可能已經(jīng)破壞了整個實(shí)驗(yàn)。在實(shí)驗(yàn)結(jié)束時,我們能否得到有意義的信息在很大程度上取決于結(jié)果的信噪比。設(shè)定噪音會影響你對結(jié)果的判斷。今天,我們教大家如何降低ELISA試劑盒操作的設(shè)定噪音。 首先,洗滌是非常重要的:洗滌步驟看起來很無聊,事實(shí)上,非常重要,因?yàn)槿绻唇壎ǖ臄?shù)據(jù)(如非特異性結(jié)合抗體或檢測試劑)留在微孔板上,則會增加設(shè)定噪音。如果必要的話,可以添加洗滌液中的鹽濃度,這將阻礙非特異性結(jié)合反應(yīng)。如果這套數(shù)據(jù)太高,而且你懷疑洗滌不夠,你可以測試你加入洗滌的次數(shù)。 其次,關(guān)閉是更關(guān)鍵的:關(guān)閉解決方案的作用是允許不相關(guān)的蛋白質(zhì)占據(jù)微孔板中潛在的結(jié)合位點(diǎn)。這減少了信號抗體非特異性結(jié)合的可能性。當(dāng)然,你也希望抗體只與目標(biāo)蛋白結(jié)合。如果你的設(shè)置過高,并且懷疑關(guān)閉量不夠,你可以測試使用更高濃度的關(guān)閉液,或者適當(dāng)延長關(guān)閉時間。 第三,抗體濃度必須優(yōu)化:我們通常跟隨兄弟姐妹留下的操作步驟,但如果試劑稍有不同,可能需要優(yōu)化抗體的數(shù)量。記住,非特異性抗體結(jié)合增加設(shè)置。為了避免這種情況,不要使用太多的初級抗體或第二抗體。 第四,檢測試劑應(yīng)該是適當(dāng)?shù)模毫硪稽c(diǎn)也很清楚:不要使用太多的檢測試劑。如果濃度太高,或者稀釋不當(dāng),就會導(dǎo)致高集。如果需要,也不要過度著色,優(yōu)化何時應(yīng)該添加終止溶液。 |
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