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培養(yǎng)細(xì)胞的具體常規(guī)觀察發(fā)表時(shí)間:2019-12-09 16:08 培養(yǎng)細(xì)胞的常規(guī)觀察 細(xì)胞接種或傳代以后,實(shí)驗(yàn)者每天或至多間隔1~2d,要對(duì)細(xì)胞做常規(guī)性檢查。觀察細(xì)胞形態(tài)和生長(zhǎng)情況以及培養(yǎng)的pH變化、有無(wú)污染等。根據(jù)細(xì)胞動(dòng)態(tài)變化,做換液或傳代處理,如發(fā)現(xiàn)異常情況應(yīng)及時(shí)采取措施。 1. 細(xì)胞形態(tài) 生長(zhǎng)狀態(tài)良好的細(xì)胞,在一般顯微鏡下觀察時(shí)可見(jiàn),細(xì)胞透明度大、折光性強(qiáng)、輪廓不清。細(xì)胞生長(zhǎng)不良時(shí),輪廓增強(qiáng),胞質(zhì)中常出現(xiàn)空泡、脂滴和其他顆粒狀物,細(xì)胞之間空隙加大,細(xì)胞形態(tài)可變得不規(guī)則甚至失去原有特點(diǎn),如上皮細(xì)胞變成類(lèi)上皮細(xì)胞等。某些染料當(dāng)細(xì)胞死亡時(shí)能透過(guò)變性的胞膜與解體的細(xì)胞核DNA結(jié)合,而令其著色。因而常用臺(tái)盼藍(lán)(trypan blue) 鑒別細(xì)胞死活,活細(xì)胞不著色,死細(xì)胞核呈藍(lán)色。 2. 細(xì)胞生長(zhǎng) 初代培養(yǎng)或傳代的細(xì)胞懸液接種以后,經(jīng)過(guò)長(zhǎng)短不同的潛伏期后開(kāi)始增殖。傳代細(xì)胞系、胚胎組織或幼體組織一般在第二天即可見(jiàn)細(xì)胞生長(zhǎng),一周內(nèi)便可連接成片。接種細(xì)胞長(zhǎng)滿瓶壁后,應(yīng)及時(shí)做再培養(yǎng)。否則由于營(yíng)養(yǎng)物消耗和代謝積累,細(xì)胞即進(jìn)入停止期或退化期。此時(shí)細(xì)胞輪廓增強(qiáng),細(xì)胞內(nèi)常出現(xiàn)顆粒狀堆積物,為膨脹的線粒體,細(xì)胞質(zhì)呈空泡化,細(xì)胞變圓、粗糙,嚴(yán)重時(shí)細(xì)胞從瓶壁脫落,只有及時(shí)再做傳代處理,才能使細(xì)胞繼續(xù)生長(zhǎng)繁殖。
3. 營(yíng)養(yǎng)液 正常情況下,培養(yǎng)液呈桃紅色。如果細(xì)胞維持在pH6.5~6.6條件下,細(xì)胞會(huì)脫落死亡。當(dāng)培養(yǎng)液酸化變黃時(shí),說(shuō)明培養(yǎng)液中代謝產(chǎn)物已堆積到一定量,需要更換新鮮培養(yǎng)液。培養(yǎng)液中如加Hepes或用5%CO2溫箱培養(yǎng)可使pH維持相對(duì)穩(wěn)定。更換營(yíng)養(yǎng)液的時(shí)間,可依營(yíng)養(yǎng)物的消耗而定,細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛時(shí)2~3d換一次,生長(zhǎng)緩慢時(shí),3~4d亦可。要特別注意各種細(xì)胞對(duì)pH值要求是不一樣的。 4. 微 生物 污染 微 生物 污染培養(yǎng) 細(xì)胞培養(yǎng) 物后會(huì)出現(xiàn)pH值改變,培養(yǎng)液呈現(xiàn)混濁狀。細(xì)菌感染后,由于細(xì)菌的運(yùn)動(dòng),光鏡觀察可見(jiàn)有微閃光;真菌感染則在鏡下見(jiàn)許多細(xì)絲狀菌絲,有時(shí)還密集有群集孢子;支原體的污染需要借助一些檢測(cè)手段才可檢出。細(xì)胞污染以后一般應(yīng)當(dāng)廢棄,對(duì)于重要的細(xì)胞株,可以參考相關(guān)專著,介紹采取一些措施清除污染。比較重要的實(shí)驗(yàn)、珍貴的細(xì)胞,至少由兩個(gè)實(shí)驗(yàn)人員獨(dú)立培養(yǎng)操作,或由一個(gè)人分次(不同時(shí))操作。除培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室的衛(wèi)生條件外,空氣中的濕度與微生物污染關(guān)系密切。重要的、周期長(zhǎng)的實(shí)驗(yàn)盡量安排在空氣濕度低的秋冬季進(jìn)行。 |
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